本发明公开了子宫内膜良恶性病变联合标志物、检测引物探针组及试剂盒，所述联合标志物包括26个目标基因的特定甲基化区域，针对这些甲基化区域的检测引物和探针，能够通过荧光定量PCR来进行检测，检测结果采用logistic回归算法即可对子宫内膜良恶性病变的风险评估，包括有效区分子宫肌瘤、子宫肉瘤、子宫内膜不典型增生以及子宫内膜癌等良恶性病变。本发明通过多基因甲基化联合检测，显著提高对子宫内膜恶性病变的检测的灵敏度以及特异性。本发明试剂盒特别适用于以宫颈脱落细胞作为样本进行子宫内膜良恶性病变的鉴别诊断，具有取样简单便捷、检测速度快、准确性高特异性等优点。