本发明公开了一种D‑氨基酸氧化酶‑无机杂化纳米花及其制备方法和应用，具体实施方法为配制磷酸盐缓冲液，以磷酸盐缓冲液为溶液，溶解D‑氨基酸氧化酶全细胞菌体；将全细胞菌液破碎，将破胞液离心，弃沉淀，取其上清，上清为溶液Ⅰ；配制可溶性盐水溶液，该溶液为溶液Ⅱ；将溶液Ⅰ经磷酸盐缓冲液稀释后加入到溶液Ⅱ中，并震荡混匀；混合液放置在25℃下孵育一定时间，离心收集沉淀，用超纯水洗涤3次，获得D‑氨基酸氧化酶‑无机杂化纳米花。本发明制备得到的D‑氨基酸氧化酶‑无机杂化纳米花稳定性相对于游离酶得到了有效的提高，实现了固定化酶的回收重复利用，从而降低了生产成本，制备得到的固化酶具有较高的生物活性。