一种纤溶酶原激活剂的仿生亲和纯化方法，属于生物技术领域。本发明包括以下步骤：(1)基础层析介质与三氯三氮嗪反应活化后，与对氨基苯甲脒反应，合成仿生亲和分离材料；(2)用上述合成的亲和分离材料制备成亲和层析柱，将含天然或改构的人组织型纤溶酶原激活剂的样品流过该亲和层析柱，天然或改构的人组织型纤溶酶原激活剂吸附在亲和层析柱上，冲洗亲和层析柱，然后变换缓冲液条件，再冲洗亲和层析柱，将结合的天然或改构人组织型纤溶酶原激活剂洗脱下来，得到纯化的天然或改构的人组织型纤溶酶原激活剂。本发明纯化步骤少，成本低，效率高，快速、简便、低成本、大批量纯化天然或改构人组织型纤溶酶原激活剂和尿型纤溶酶原激活剂。