本发明提供了一种新型组织型纤溶酶原激活物突变体，及稳定生产该新型组织型纤溶酶原激活物突变体的方法，以及有关的表达载体与工程细胞构建、表达和纯化的工艺。突变后的组织型纤溶酶原激活物突变体基因在毕赤酵母中分泌表达非常稳定，同时通过发酵与纯化工艺优化，提高了表达量和纯化得率，具有稳定性好、表达水平高、活性高、生产工艺简便的优点。本发明可高效、简便、低成本的获得新型组织型纤溶酶原激活物突变体纯品。