本发明公开了一种大肠癌蛋白标记物平行检测液相芯片，主要由微球，捕获抗体，检测抗体，链霉亲和素－藻红蛋白组成，其中：所述捕获抗体分别与相应的各号微球形成偶联体，以红色激光激发其球形基质上的红色分类荧光，依据其球形基质的色彩不同确定类型；所述检测抗体是经活化的生物素标记的抗体；所述捕获抗体和检测抗体均能特异与其相应的大肠癌蛋白标记物结合；所述检测抗体与链霉亲和素－藻红蛋白结合，以绿色激光激发藻红蛋白，测定球形基质上结合的报告荧光分子的数量，用于间接确定球形基质上结合的大肠癌蛋白标记物的含量。本发明还公开了所述大肠癌蛋白标记物平行检测液相芯片在制备临床检测试剂中的应用。