本发明提供了用于检测动物组织中磺胺类药物的试剂盒，是用酶联免疫方法对预处理的动物组织、蜂蜜、尿液、牛奶进行检测。该酶联免疫试剂盒包括：包被了磺胺类药物抗原或抗抗体的酶标板、磺胺类药物鼠单克隆抗体工作液、磺胺类药物标准品溶液、酶标记的抗抗体或磺胺类药物抗原溶液、底物显色液、浓缩洗涤液、浓缩提取液、终止液。本发明还公开了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测磺胺类药物的方法，它包括以下步骤：首先进行样品前处理，然后用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明提供的检测动物组织中磺胺类药物残留的酶联免疫试剂盒及检测方法操作简便、费用低廉、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本筛查。