本发明公开了一种用等距扇束投影进行重建的光学投影层析成像方法(OPT)，属于生物组织的光学三维成像技术领域。本发明的目的在于设计OPT中的光学成像系统及相应的重建算法，消除目前的OPT成像方法中对样品投影的平行近似要求，增大OPT的成像范围及提高分辨率。调节光学成像系统中距样品最近的透镜为系统的孔径光阑，限制进入光学成像系统的成像光束口径，使来自于样品不同点进入光学成像系统的成像光束口径相同，则样品的投影数据可组成等距扇束投影，用等距扇束投影的重建算法进行重建，从而消除了目前的OPT成像方法中对投影的平行近似要求。