本发明属于数字图像处理和化学分析领域，其特征在于利用数码相机或摄像机在不同波长的光照条件下对薄层板进行拍摄；对所拍摄的图像进行镜头畸变校正、噪声虑除预处理；利用点样时点均匀分布的特点以及纵向距离等分原则确定控制点；根据控制点再利用插值方法构造出图像背景；将构造出的背景图像从镜头畸变校正后的薄层图像中去除，并根据所构造的背景图像对每一像素点进行亮度归一化；对去掉背景图像后的薄层图像进行分割；根据分割结果对每个区域内的灰度进行积分。本方法不仅能够准确的描述所给图像背景信息，分割出目标图像，而且还可以对每一点的光照强度进行修正，图像分割以及样品定量分析结果精度都很高，重复性也非常好，易于推广。