本发明涉及一种牛β－酪蛋白基因靶向的载体，包括(1)具有5至12kb长度的第一区域，该区域和牛β－酪蛋白基因的启动子和侧翼核酸序列同源，并包含牛β－酪蛋白基因的外显子1、内含子1和外显子2；(2)用于克隆编码目的蛋白质的核酸的区域；(3)编码正选择标记的区域；(4)具有2.8至3.5kb长度的第二区域，该区域和牛β－酪蛋白基因的核酸序列同源，并包含牛β－酪蛋白基因外显子5、6、7和8，以及内含子5、6和7；其中，按照牛β－酪蛋白基因5’－3’的排列方向，和第一区域相应的核酸序列位于和第二区域相应的核酸序列的上游。本发明还涉及生产转基因牛的方法，所述的转基因牛使用上述携带编码目的蛋白基因的载体进行牛β－酪蛋白基因靶向，并从上述转基因牛的牛奶中获得大量的目的蛋白质。