本发明提供了一种新型高碱性蛋白酶及其应用，该新型碱性蛋白酶具有高碱性活性、表面活性剂耐性、非钙依赖性的耐热性等作为特征的性质，在高碱性洗涤剂中发挥出优异的性能；本发明还提供了编码该新型碱性蛋白酶的氨基酸序列的基因。本发明所提供的碱性蛋白酶具有如下性质：该碱性蛋白酶的作用pH范围为5～13、最适pH在12.6附近、最适温度为70℃、在pH10的条件下加热至65℃时确认不到活性的降低、且最适温度和热稳定性不受Ca²⁺离子的影响。例如，具体地说，本发明所提供的碱性蛋白酶具有序列编号3所示的构成成熟酶的氨基酸序列，或具有其中的部分氨基酸出现缺失、取代、反转、增加或插入的氨基酸序列，或是源自德兰士瓦嗜碱菌的酶。该碱性蛋白酶切断酸型胰岛素B链的29处肽键中的26处。