本发明提供一种中药水蛭HPLC指纹图谱建立的方法及其标准指纹图谱。首先制备水蛭药材溶液，取水蛭最粗粉适量，精密称重，以生理盐水作为溶剂室温浸泡16小时，离心，取上清液用微孔滤膜(0.45um)过滤，作为水蛭对照药材溶液；其次制备参照物溶液，取次黄嘌呤对照品适量，精密称重，用流动相溶解、稀释，制成参照物溶液；最后，进行测定，分别精密吸取水蛭对照药材溶液与参照物溶液，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，记录50分钟色谱，其中高效液相色谱条件为：色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液和50％甲醇的梯度洗脱液，检测波长为254nm。将待测水蛭样品指纹图谱与标准指纹图谱对比，比较其异同。本发明的优点是方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握。