本发明公开了一种净化氯霉素的方法及其专用免疫亲和色谱柱。该色谱柱的填料为净化氯霉素的免疫亲和吸附剂，该免疫亲和吸附剂是由固相载体和与其偶联的氯霉素多克隆抗体或单克隆抗体组成；所述氯霉素多克隆抗体或氯霉素单克隆抗体是以氯霉素半抗原与载体蛋白的偶联物为免疫原得到的；所述氯霉素半抗原是将氯霉素琥珀酸酯溶于蒸馏水中，再加入吗啉代碳化二亚胺和N－羟基琥珀酰亚胺混合后，得到氯霉素的琥珀酸衍生物即为氯霉素半抗原。本发明的净化方法结合色谱法高效检测氯霉素的含量，弥补了单纯免疫测定技术直接测定样本的信息量太少、定量准确差，或理化方法选择性低等不足，体现了免疫学技术和常规理化技术在分析机制的互补性。