土霉素胶体金法检测试纸，属于用标记抗体与抗原免疫反应来测试待测物质的材料和方法。本发明目的是提供使用方法简便，省时省力省钱，灵敏度高的土霉素检测试纸及制备方法。本发明用土霉素偶联抗原、抗鼠IgG抗体、胶体金标记的土霉素单抗和其它试剂固着在硝酸纤维素膜上制成，应用层析式一步竞争法的原理检测样品中的土霉素残留量。本发明操作过程不超过20分钟，灵敏度为2ppb，简便、经济，能满足对牛奶、血清、饲料、尿液、肉类和组织提取物等样品进行土霉素残留快速检测的需求。