本发明公开了一种酪酸菌活菌制剂及其制备方法，由酪酸菌在酪酸菌种子培养基中经三级种子扩大培养和在酪酸菌发酵培养基中发酵，再经菌体收集、干燥制粉、菌粉检验、配料、成品检验、包装工序制得；酪酸菌种子培养基由蛋白胨、酵母膏、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、葡萄糖和水组成；酪酸菌发酵培养基由蛋白胨、酵母膏、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、淀粉、碳酸钙和水组成。本发明制备的酪酸菌活菌制剂，芽孢率高、活菌含量高，价格低廉，人兽两用。不仅可以用来治疗人体胃肠道疾病，而且对猪、鸡的白痢病有较好的预防和治疗作用，并能有效促进它们的生长。