本发明的用于鉴别扩散型松材线虫的化学染色法，步骤是：1)将刺激剂溶于二甲基亚砜溶剂中；刺激剂与二甲基亚砜的重量份配比为7∶100；刺激剂中的组份A、B及组份C重量份配比为54－90∶9－43∶1－5；组份A为α－蒎烯，组份B为β－蒎烯，组份C为长叶烯；2)将溶于二甲基亚砜中的刺激剂滴入含有松材线虫的水溶液中，并加入10μL的重量百分浓度为0.2％的库马西亮蓝，室温下放置24小时，显微镜下观察：其分泌的特异性蛋白质被染色的为扩散型松材线虫。本发明使用的刺激剂源自松树挥发物，属天然有机物质，结构稳定，无毒，无污染；且操作简便可靠，适于口岸及林间基层扩散型松材线虫调查及检疫。