本发明是一种脑蛋白水解物及其冻干制剂的制备方法，该方法包括取经检验合格的新鲜或冻存健康猪脑，用胶体磨匀浆，收集匀浆液；分别用胃蛋白酶、胰酶水解，收集水解上清液，采用滤纸进行过滤，收集滤出液；滤出液上羟基磷灰石层析柱进行吸附分离纯化，调配肽图，收集目标物，采用对分子截留为8KD的滤膜进行超滤，收集滤出液，进行定氮、氨基酸分析，按国家药品监督管理局2000年12月28日颁布的药品标准(编号WS₁－XG－25－2000)计算氨基酸用量，添加相应氨基酸配制成浓配液，0.22μm滤膜进行精过滤，即得注射用脑蛋白水解物的原液。还可进一步按冻干制剂处方制备成脑蛋白水解物冻干制剂。该方法环保且收率高，成本低。