本发明公开一种人脑微血管生成模拟血脑屏障的体外构建方法，包括以下步骤：配制成人脑微血管内皮细胞悬液和人脑星形胶质细胞悬液，配制纤维蛋白原母液和凝血酶母液；将内皮细胞悬液、星形胶质细胞悬液、DMEM培养基、纤维蛋白原母液和凝血酶母液混合，配制成混合细胞凝胶溶液；将混合细胞凝胶溶液注入到微流控芯片中，恒温孵育至凝胶化后，向所述微流控芯片中加入内皮细胞生长培养基，构建成3D细胞培养芯片；对所述3D细胞培养芯片进行连续培养，以使内皮细胞和星形胶质细胞生长至形成脑部微血管网络结构，即对应生成模拟血脑屏障。本发明提供的技术方案，成功建立了血脑屏障的体外模型，更清楚、准确地反应了血脑屏障的特性。