本发明提供一种飞行时间质谱仪信号聚焦的方法。所述方法包括：离子源产生待测离子传输到推斥模块；所述推斥模块在一次预设的分析周期内以不同的推斥能量多次发射离子，使待测离子在飞行腔内飞行后通过离子阀于同一时刻到达检测系统；所述检测系统获取所述待测离子，形成质谱图；所述检测系统通过分析不带离子聚焦的常规模式下各所述待测离子的位置及分布情况，验证所述推斥模块的发射能量参数，以确认聚焦效果。本发明在一个周期内多次而非一次反射离子，信号聚焦的方法简单；使用离子阀降低了无关离子对检测系统寿命的影响；具有较低的空间电荷互斥效应，仪器容易获得更高的质量分辨率。