一种基于二茂铁作为电子供体的适配体生物传感器制备方法及应用，步骤如下：在活化羧基的氧化石墨烯溶液中加入壳聚糖溶液，然后将该混合溶液修饰在丝网印刷碳电极表面；适配体末端添加特定碱基对设计合成发卡结构，并在两端分别修饰氨基和二茂铁，通过酰胺键的形成将该适配体链有效固定在氧化石墨烯‑壳聚糖/丝网印刷碳电极表面；适配体与目标物的特异性识别诱导适配体构象改变，从而导致二茂铁在磷酸盐缓冲溶液中产生的电流信号发生变化，进而对目标物进行监测。本发明能实现丙溴磷、甲拌磷、水胺硫磷、氧乐果四种有机磷农药的超灵敏检测，检测时间短，检测限低，为有机磷农药以及其他领域有害物质的检测提供了一种新技术。