本发明公开了一种SAG2（表面抗原2）基因、ROP9（棒状体蛋白9）基因和MIC3（微线体蛋白3）基因重组腺病毒构建的方法及重组腺病毒和应用。从Toxoplasma gondii RH株中分别扩增出SAG2基因、ROP9基因和MIC3基因，将获得的目的基因克隆到穿梭载体pHBAd‑EF1a‑MCS‑3flag‑CMV‑EGFP中，利用脂质体转染法将重组腺病毒穿梭质粒pHBAd‑SAG2‑ROP9‑MIC3‑EGFP与腺病毒大骨架pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293A细胞，重组并包装获得含有SAG2基因、ROP9基因和MIC3基因的重组腺病毒Ad‑SAG2‑ROP9‑MIC3‑EGFP；将此重组腺病毒免疫Balb/c小鼠后，小鼠的抗体水平得到显著提高，活化的TCL和Th淋巴细胞比例显著增高，IF‑γ、IL‑6和TN‑α等细胞因子显著增高，且对Balb/c小鼠产生一定的保护作用。