一种快速构建基因打靶重组用载体的方法
发明专利申请公布后的视为撤回
摘要
本发明公开了一种借助于Gateway克隆系统的快速构建基因打靶重组用载体的方法。首先，它用特殊设计的PCR引物进行PCR扩增，得到用于同源重组的5’和3’同源臂，通过BP重组反应分别装入pDONRP4－P1R和pDONRP2R－P3载体中；然后，将目的片段装入我们创造性构建的中间载体pDONR loxP/MCS/loxP－FRT/NEO/FRT中；最后，将以上3种载体与pDEST R4－R3TK载体的混合物在通过1小时快速LR重组反应后，5’同源臂，中间片段，3’同源臂，以及TK负筛选元件便会自动按照设计的顺序拼接，转化并纯化后即得到基因打靶用载体。该方法具有快速、灵活、省时、省力等优点，并突破了传统方法中内切酶位点分布的限制，在基因功能研究方面有重要意义。
基本信息
专利标题 ：
一种快速构建基因打靶重组用载体的方法
专利标题（英）：
暂无
公开（公告）号 ：
CN1844401A
申请号 ：
CN200610037837.9
公开（公告）日 ：
2006-10-11
申请日 ：
2006-01-17
授权号 ：
暂无
授权日 ：
暂无
发明人 ：
孔冬高翔王鹏飞章念郑斌
申请人 ：
南京大学
申请人地址 ：
210093江苏省南京市汉口路22号
代理机构 ：
南京苏高专利事务所
代理人 ：
阙如生
优先权 ：
CN200610037837.9
主分类号 ：
C12N15/63
IPC分类号 ：
C12N15/63
相关图片
IPC结构图谱
C
C部——化学；冶金
C12
生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程
C12N
微生物或酶；其组合物；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基。
C12N15/00
突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体或其分离、制备或纯化；所使用的宿主
C12N15/09
DNA重组技术
C12N15/63
使用载体引入外来遗传物质；载体；其宿主的使用；表达的调节
法律状态
2008-05-28 ：
发明专利申请公布后的视为撤回
2006-12-06 ：
实质审查的生效
2006-10-11 ：
公开
注：本法律状态信息仅供参考，即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
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1、
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