本发明公开一种新型对苯二甲醛缩D‑氨基葡萄糖席夫碱的制备方法，包括如下步骤：称取D‑氨基葡萄糖盐酸盐放入烧杯中，加入无水甲醇，再加入氢氧化钠反应，过滤除去NaCl，向滤液缓慢滴加对苯二甲醛的无水甲醇溶液，于35℃水浴条件下反应后冷却，放置一夜，析出固体粉末，过滤，用冷的无水甲醇洗涤数次，真空干燥得到对苯二甲醛缩D‑氨基葡萄糖席夫碱；该类化合物具有较好的水溶性，良好的光学性能，并具有一定的抑菌活性。该类化合物可以作为荧光探针用于肿瘤细胞成像，有望扩展席夫碱类荧光染料的应用范围。