本发明提供了一种分离检测血清脂蛋白的方法，其是将血清样品与缓冲溶液混合，配制血清样品稀释液，向其中加入苏丹黑B的有机溶剂溶液，并置于恒温摇床中震荡≥3 h，得到染色后的血清样品稀释液，采用非对称场流分离联用紫外可见光检测器对染色后的血清样品稀释液中的高密度脂蛋白与低密度脂蛋白进行分离并检测两者的粒径分布。本发明方法操作简单，分析时间短，既能定性检测血清中的脂蛋白，又能够准确地定量分析高密度脂蛋白与低密度脂蛋白的粒径分布，避免血清样品中游离蛋白质对脂蛋白分离的干扰，减小脂蛋白样品与过滤膜的交联，具有广泛的应用前景。