本发明公开了一种基于石墨炔的电化学生物传感器及其制备方法和应用，首先将模式酶固载在石墨炔表面，再与成膜材料混合后生成复合材料，将其固定在玻碳电极表面制得电化学生物传感器。本发明充分利用了石墨炔这一新型的二维全碳纳米材料的优势，如与石墨烯等二维材料类似的平面结构，较大的比较面积，较好的水相分散性以及高共轭结构，作为传感器的酶载体制备生物传感器，制备过程简单，成本低；无需复杂的样品前处理过程，对双酚类化合物的检测灵敏度高、检出限低、重现性好；对目标化合物响应迅速，易于微型化，适合点现场检测和连续在线监测等。