本发明公开了一种鱼肉腐败菌氨基酸脱羧能力的检测方法，包括：用磷酸盐缓冲液溶解待测氨基酸底物配制得到待测氨基酸的底物溶液，将含待测腐败菌的菌悬液加入到所述待测氨基酸的底物溶液中作为评价组，将含待测腐败菌的菌悬液加入到磷酸盐缓冲液中作为对照组，将无菌生理盐水加入到所述待测氨基酸的底物溶液中作为空白组，分别在相同条件下培养并提取评价组、对照组和空白组的生物胺，检测得到生物胺浓度C_评价、C_对照和C_空白，计算得到腐败菌对相应待测氨基酸的脱羧能力。本发明的方法能广泛适用于多种鱼肉中各类腐败菌的氨基酸脱羧能力的检测，适用于定量检测和评价腐败菌对多种特定氨基酸的脱羧能力，适用于评价鱼肉腐败菌产生物胺的能力。