本发明公开了一种手性氨基酸的检测方法，包括以下的步骤：（1）衍生：将标准的氨基酸样品与待测的氨基酸样品分别进行衍生，衍生的条件如下：在‑20℃~40℃条件下，将亚膦酸酯衍生化试剂、卤代试剂、碱、有机溶剂、水和氨基酸混合反应，反应时间为0.1~100小时，得到衍生化的氨基酸；（2）检测：将步骤（1）的标准的衍生化的氨基酸样品与待测的衍生化的氨基酸样品通过同一光学检测器检测并在同等参数条件下检测，得到的谱图进行比对和定性定量分析；优点在于操作简便，无需对衍生化后的样品进行萃取分离，可利用多种检测器进行检测氨基酸手性异构体的含量，灵敏度高，同时可以对酸性氨基酸以及对含二级胺的脯氨酸的氨基酸手性异构体进行检测。