一株高效表达几丁质酶重组菌的构建及高酶活突变体的筛选
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摘要
一株高效表达几丁质酶重组菌的构建及高酶活突变体的筛选。本发明借助重组蛋白技术实现BcchiA1在枯草芽孢杆菌中的高效分泌型表达，解决了大部分微生物几丁质酶分泌量不足的问题。同时，创建一种新的几丁质酶高通量筛选方法，极大地提高了筛选通量和效率。此外，本发明涉及公开几株高酶活几丁质酶突变体，BcchiA1(Y10A)、BcchiA1(R301A)、BcchiA1(E327A)、BcchiA1(Y10A/R301A)、BcchiA1(Y10A/E327A)、BcchiA1(R301A/E327A)和BcchiA1(Y10A/R301A/E327A)，酶活性比野生型BcchiA1分别提高了2.49倍、0.67倍、3.61倍、2.39倍、3.46倍、4.75倍、16.89倍，其中BcchiA1(Y10A/R301A/E327A)酶活性最优。最终，将几丁质酶BcchiA1及其最优突变体BcchiA1(Y10A/R301A/E327A)与来源于Bacillus atrophaeus的单加氧酶BatLPMO10分别协同作用后，可使BcchiA1和BcchiA1(Y10A/R301A/E327A)的水解效率分别提高50.00％和46.71％。
基本信息
专利标题 ：
一株高效表达几丁质酶重组菌的构建及高酶活突变体的筛选
专利标题（英）：
暂无
公开（公告）号 ：
CN112831510A
申请号 ：
CN201911280564.4
公开（公告）日 ：
2021-05-25
申请日 ：
2019-12-13
授权号 ：
CN112831510B
授权日 ：
2022-04-22
发明人 ：
张大伟王思佳付刚
申请人 ：
中国科学院天津工业生物技术研究所
申请人地址 ：
天津市滨海新区天津市空港经济区西七道32号
代理机构 ：
天津市三利专利商标代理有限公司
代理人 ：
苏宇欢
优先权 ：
CN201911280564.4
主分类号 ：
C12N15/56
IPC分类号 ：
C12N15/56 C12N9/42 C12N15/75 C12N1/21 G01N21/31 C12R1/125
IPC结构图谱
C
C部——化学；冶金
C12
生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程
C12N
微生物或酶；其组合物；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基。
C12N15/00
突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体或其分离、制备或纯化；所使用的宿主
C12N15/09
DNA重组技术
C12N15/11
DNA或RNA片段；其修饰形成
C12N15/52
编码酶或酶原的基因
C12N15/55
水解酶
C12N15/56
作用于糖基化合物上，如淀粉酶、半乳糖苷酶、溶菌酶
法律状态
2022-04-22 ：
授权
2021-06-11 ：
实质审查的生效
IPC(主分类) : C12N 15/56
申请日 : 20191213
申请日 : 20191213
2021-05-25 ：
公开
注：本法律状态信息仅供参考，即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
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1、
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