本发明公开了一种百草枯分子印迹固相微萃取涂层溶液的制备及应用，是将单羟基七元瓜环和百草枯研磨制作包合物，将包合物键合在由二氯甲烷、γ‑缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷、端羟基聚二甲基硅氧烷、甲基三甲氧基硅烷、聚甲基氢硅氧烷和98％的三氟乙酸聚合而成的溶胶‑凝胶网络上，得涂层溶液。将涂层溶液制成搅拌棒，并与高效液相色谱联用分析测定环境水样或果蔬样品中的百草枯农药残留。本发明利用制备的涂层溶液来制作涂层，可实现对百草枯的专属性检测，检测限低，灵敏度好，使用简便，可满足环境水样和食品基质中痕量百草枯的检测要求；此外，还具有制备简单，涂层稳定耐酸碱和有机溶剂，热稳定性好，检测所需样品少，有机溶剂消耗少的特点。