本实用新型涉及时间分辨荧光S‑100β蛋白检测卡及试剂盒。所述检测卡包括卡壳和设置在卡壳内的检测试纸条，所述检测试纸条由底衬以及粘贴在底衬上的滤血膜样品垫、玻璃纤维结合垫、棉纤维过滤垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成，顺次搭接粘贴在底衬上。本实用新型试剂盒能够准确定量检测样本中微量S‑100β的含量，滤血膜样品垫过滤样品中红细胞、大颗粒杂质以及非特异性结合蛋白，使得样本无需进行预处理和稀释液稀释，有效降低假阳，过滤垫进一步过滤使得颗粒更加均匀反应更充分，可提高灵敏的和准确性，标记通过共价键将微球与抗体连接，标记产物稳定，具有检测范围宽、灵敏度高、准确度高、检测快速简便等特点。