本发明公开了一种双靶向的酸敏感普鲁士蓝载药体系的制备方法及应用，可以有效地解决白血病耐药以及肝脏、脾脏浸润的问题。解决的技术方案是，首先，酸敏感聚乙二醇‑聚乙烯亚胺高分子通过静电、氢键作用吸附在普鲁士蓝纳米颗粒表面；其次，CXCR4拮抗多肽(E5)和透明质酸通过化学键与普鲁士蓝纳米颗粒表面的聚乙烯亚胺分子连接；再次，柔红霉素通过氢键作用吸附于普鲁士蓝纳米颗粒表面。本发明制备方法简单温和，材料安全易得且具有良好的生物相容性，制备的载体具有血液长循环能力、肿瘤细胞双靶向能力、溶酶体逃逸能力、酸敏感药物释放能力，能够有效增强小鼠白血病治疗效果并抑制骨髓归巢与肝脏、脾脏浸润。