本发明公开了一种核酸扩增后处于灰区样本的确证方法。在检测试剂管内加入试剂，将核酸扩增反应管放入核酸扩增反应管架中，盖上密封盖，卡盒主体和密封盖形成密闭空间；再向下按压密封盖形成预密封；再继续向下按压密封盖，刀片与核酸扩增反应管接触，并割破核酸扩增反应管的底部，核酸扩增反应管内液体流出至检测试剂管内并然后发生反应；光源照射观察结果确证检测；装置包括卡盒主体、核酸扩增反应管架和密封盖，卡盒主体包括外壳、刀架和刀片。本发明不改变现有的PCR扩增或是等温核酸扩增操作的任何流程，能对灰区的检测样本确证检测，灰区信号的确证灵敏度高、特异性好，整个确证过程时间短，成本低、操作简单。