本发明涉及生物医学纳米材料技术领域，具体涉及一种肿瘤靶向型光声成像引导多阶段治疗纳米探针及制备方法。该探针以牛血清白蛋白生物矿化法合成的分散均匀、表面电荷为负的牛血清白蛋白包裹硫化铜纳米颗粒为基底，通过静电吸附层层包裹的方式，在硫化铜纳米颗粒外部依次包裹具有正电荷的左旋多聚赖氨酸和电性为负的葡萄糖氧化酶混合透明质酸层，以提供一种具备光声成像及多阶段治疗的纳米探针，该材料在肿瘤微环境中可依靠透明质酸主动靶向三阴性乳腺癌细胞膜表面丰富的CD44受体，释放葡萄糖氧化酶进行饥饿治疗，纳米颗粒表面电荷翻转，增加其细胞摄取率，进一步在肿瘤细胞内进行光热治疗和化学动力学治疗，实现和提高纳米探针的成像和治疗性能。