本发明公开了一种层析柱和原油族组分的分离方法及应用。层析柱包括从上到下依次连通的第一圆柱体、第二圆柱体、第三圆柱体和圆锥体，在第一圆柱体顶端设置物流入口，在所述圆锥的底部设置物流出口。分离方法包括：步骤1、根据固定相对不同组分吸附能力的区别，用溶剂将原油中饱和烃和芳烃先后顶替并分离流出，按照顺序进行收集；步骤2、根据烃类折光率和芳烃化合物在紫外光照射下发荧光特性，确定不同时间段流出馏分的烃类组成特性。本发明的层析柱和分离方法对原油中的凝析油或轻质油进行分离，具有分离时间短，能够减少原油中轻质组分的挥发，较完整地保留原油中的组分信息的优点。