本发明公开了一种基于颗粒计数的均相反应体系、方法及应用，涉及食品安全、体外诊断和环境监测领域，该体系包括绝缘微球，绝缘微球的表面偶联有生物配体，生物配体为与目标物相对应的抗体、完全抗原、核酸适配体或DNA探针；提供目标物与微球‑生物配体反应的载体；用于测定颗粒物粒径和数量的颗粒计数器；微球‑生物配体与目标物反应后，反应体系中存在未反应的微球‑生物配体、微球‑生物配体‑目标物或/和粒径＞微球‑生物配体的复合物，其中，微球‑生物配体、微球‑生物配体‑目标物和微球的粒径相当，使用颗粒计数器对反应后粒径与微球粒径相当的物质数量进行测定，确定目标物浓度。本发明的检测成本较低，速度较快。