本发明提供了一种烟酰胺单核苷酸的制备方法。该制备方法包括将包含烟酰胺核苷盐、1,8‑双二甲氨基萘、三氯氧磷及溶剂的原料进行磷酰化反应，得到包含烟酰胺单核苷酸的反应液。一方面1,8‑双二甲氨基萘可抑制三氯氧磷继续对2位或3位羟基的进攻；另一方面1,8‑双二甲氨基的一个氮原子有利于2位羟基氢的拔除，另一个氮原子有助于磷酰氯中氯的去除，在上述两个N原子的协同作用下有利于氯化氢的去除。同时，由于1,8‑双二甲氨基萘中的两个氮原子距离较近，使得1,8‑双二甲氨基萘在脱除氯化氢的过程中形成的过度中间体更稳定，从而使脱除氯化氢的过程倾向于分子内的反应，进一步地提高了磷酰化反应的选择性。