本发明涉及一种乳酸生物传感器的制备方法，属于乳酸或乳酸盐检测技术领域。具体步骤包括铜纳米线修饰电极的制备，铜纳米线修饰电极电沉积原位生长铜铁普鲁士蓝，乳酸氧化酶的固定。本发明基于电化学沉积的方法，在一定量的铜纳米线上电沉积原位生长Cu/Fe‑PBA，通过调整电沉积的方法以及电沉积的条件来调控纳米材料的生长，从而调控材料的催化活性和导电性。本发明利用电沉积技术制备出具备高催化活性和高导电性的生物传感电极，再结合乳酸氧化酶制备出高性能的乳酸生物传感器。本发明方法制作简单，重复性高，且制备的乳酸生物传感器对乳酸和乳酸盐具有较高的灵敏度和较宽的线性范围。