本发明实施例公开了一种用于纯化凝血因子VII的方法包括：对凝血因子VII转基因兔的兔乳进行脱脂，得到脱脂兔乳；将所述脱脂兔乳经SP Fast Flow阳离子层析，获得含凝血因子VII的第一纯化液；将所述第一纯化液经Heparin Bestarose HP层析柱层析，得到含凝血因子VII的第二纯化液；将所述第二纯化液经Butyl‑650M层析得到含凝血因子VII的第三纯化液。本发明用于纯化凝血因子VII的方法，利用SP Fast Flow填料对凝血因子VII进行粗纯，以去除兔奶中大部分的杂蛋白，随后用Heparin Bestarose HP层析柱对SP Fast Flow洗脱样品进行纯化，最后用Butyl‑650M层析对Heparin Bestarose HP洗脱样品进行纯化，这样就减少了兔乳中大量的酪蛋白对亲和填料载量与纯化效果的影响，可有效提高凝血因子纯度，降低成本，提高经济效益。