本发明属于畜牧兽医技术领域，公开了一种畜用复合维生素氨基酸注射液及其制备方法和应用，该注射液是将多种维生素、氨基酸和辅料等原料经溶解混匀、调节pH值、过滤灭菌等工艺制得。本发明的制备工艺简单，经改进水包油工艺，制得的注射液澄明度高、性质稳定，适用于牛、犬等维生素和氨基酸缺乏症、有助于增强动物体质且辅助治疗细小病毒感染。本发明通过调整原料组分配比，针对性添加维生素、氨基酸和其他辅助物质，解决现有复合氨基酸注射液的注射液性质不稳定、效果一般的问题。本发明的产品适用于畜疾病防治。