本发明涉及一种用于筛选抗热应激肉羊的血清代谢物标志物及筛选方法和应用，属于畜牧生产和应用生物技术领域，本发明通过收集抗热应激肉羊和非抗热应激肉羊外周血样本，采用超高效液相色谱‑质谱技术，结合系统的生物信息学分析方法，从而对抗热应激和非抗应激肉羊血清样本中差异代谢物进行筛选。所述标志物为反式茴香醚，通过所述代谢物标志物以及检测该代谢标志物的试剂，可以筛选耐热肉羊，结果准确客观可靠，且无需提供其他组织样品，为耐热肉羊的筛选奠定基础，具有较好的推广价值。