本发明涉及检测试剂技术领域，特别涉及一种牛奶过敏原特异性IgE检测试剂盒。该试剂盒包括：链霉亲和素包被的磁微粒、生物素标记的牛奶过敏原、辣根过氧化物酶标记的抗人IgE抗体、校准品、生物素标记的抗人IgE抗体；其中，生物素标记的牛奶过敏原包括生物素标记α‑乳白蛋白、生物素标记β‑乳球蛋白、生物素标记α‑酪蛋白、生物素标记β‑酪蛋白、生物素标记κ‑酪蛋白及生物素标记牛血清白蛋白。本发明对牛奶过敏蛋白进行分别标记，并按特定比例进行标记，混合配制牛奶过敏蛋白制备抗原溶液的方法，可以提高检测灵敏度，防止单类抗体检测漏诊的问题；与胶体金、免疫印迹法等手工实验相比，具有反应时间短、操作简便、通量大的优点。