本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种小麦过敏原特异性IgE的检测试剂盒及其检测方法。该试剂盒包括磁微粒、酶标记抗人IgE抗体、生物素标记的小麦过敏原；所述小麦过敏原由小麦蛋白提取物经热处理或预处理剂处理获得；所述预处理剂包括叠氮化钠处理、L‑半胱胺酸、L‑半胱胺酸盐酸盐中的一种或多种。本发明将小麦过敏原进行特定的预处理后进行生物素标记，利用链霉亲和素制备磁微球、辣根过氧化物酶标记抗人IgE抗体的化学发光免疫分析法，全自动操作，保证了检测结果的准确性，提高了测试通量和检测结果的特异性、灵敏度。