本发明公开了一种可视化区分检测的比率荧光探针制备及使用方法，其制备方法具体包括以下步骤：Step 1，硅基碳量子点的制备；Step2，包裹硅基碳量子点的纳米介孔分子印迹材料的制备；Step3，纳米介孔分子印迹材料的表面修饰；Step4，基于纳米介孔分子印迹材料的比率荧光探针的制备；其使用方法包括：（1）将四环素或土霉素稀释呈不同梯度浓度的溶液；（2）取制备的基于纳米介孔分子印迹材料的比率荧光探针分散于超纯水中，（3）在石英比色皿中加入的pH=8的Tris‑HCl缓冲溶液和的溶液混匀之后分别滴加步骤（1）中的四环素溶液或土霉素溶液进行荧光测定；本发明的主体基质为具有介孔结构的二氧化硅分子印迹层，方法可靠，可以进行大量生产，并在社会中广泛应用。