本发明涉及一种从罗汉果根中提取分离罗汉果酸的方法，包括以下步骤：罗汉果根用酸性的醇溶液回流提取，提取液调节至碱性，过滤，浓缩，用低极性有机溶剂进行第一次萃取，分层为碱水层和有机溶剂层，取碱水层调节至酸性，用低极性有机溶剂进行进行第二次萃取，分层为酸水层和有机溶剂层，有机溶剂层进行脱色，过滤，浓缩，干燥，得到罗汉果总酸产品。本发明采取了“回流提取‑水解”同步的方法，在同一个步骤同时实现了罗汉果酸的提取和罗汉果酸苷的水解，节约了物料和能源，并提高了罗汉果酸的得率。本发明方法工艺连贯、简单，可操作性强，生产成本低，产品含量高、收率高，适合工业化生产的从罗汉果根中提取、分离罗汉果酸的方法。