本发明公开了一种防治花卉蛞蝓的线虫制剂及制备方法和应用，属于生物农药技术领域。本发明的线虫制剂包括含有不同活性成分的制剂A和制剂B，制剂A的活性成分包括寄生性小杆线虫和多酚氧化酶的底物抑制剂L‑多巴；制剂B的活性成分包括多酚氧化酶的结构抑制剂槲皮素。应用本发明的线虫制剂在防治花卉蛞蝓时，制剂A于傍晚施用于花卉根际土壤表面；制剂B于同一天的下午喷于花卉的嫩芽、叶片上。本发明首次将蛞蝓生防因子寄生性小杆线虫与蛞蝓多酚氧化酶的两种功能抑制剂结合使用，并利用蛞蝓食性引诱极大提高了寄生性小杆线虫的田间速效性，并通过制剂A和制剂B选用不同的施用位置、施用时间和方法，加速了线虫侵染致死蛞蝓。