本发明涉及一种超氧阴离子自由基近红外荧光探针MB‑SO及其制备方法和应用，荧光探针MB‑SO的结构式如下，该探针具有灵敏度高(检测限14nM)、选择性好，响应速度快(30s)的优点。在PBS缓冲液中，荧光强度与O₂^·‑浓度呈现良好的线性关系(0‑10μM)，说明探针适合定量检测O₂^·‑；探针MB‑SO还实现了HT‑22细胞中O₂^·‑的荧光成像，也实现了小鼠活体水平内源性O₂^·‑的灵敏检测，且响应快，荧光强度较稳定；特别是可以借助探针MB‑SO对癫痫小鼠脑部的O₂^·‑进行荧光成像以及定量检测，是可视化和定量检测细胞、活体中O₂^·‑水平的有效工具。