本发明公开了一种融合蛋白及其制备方法与应用。所述融合蛋白包括GSDME突变蛋白和肿瘤细胞特异性穿膜肽；所述GSDME突变蛋白中将GSDME蛋白中的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶识别的序列突变为基质金属蛋白酶识别的氨基酸序列提供对肿瘤的靶向作用；通过半胱氨酸突变为丙氨酸降低GSDME蛋白在体外的错误折叠率，增加其成药的可能性。构建了具有肿瘤靶向性和穿透性以及肿瘤微环境特异性激活的融合蛋白，为抗癌靶向药的开发提供了新的思路；能够直接将焦亡组件GSDME的N端送入肿瘤细胞内诱导焦亡并且通过激活机体自身免疫从而提高其他抗肿瘤免疫疗法的敏感性，扩大了现有抗肿瘤免疫疗法的效率和适用范围，具有重要意义。