本发明公开了一种荧光免疫芯片及其制备方法与应用，该荧光免疫芯片是将万古霉素‑牛血清白蛋白偶联物包覆在聚碳酸酯材质的芯片上得到。该荧光免疫芯片通过量子点标记三种革兰氏阳性食源性致病菌的抗体制备量子点‑抗体偶联物，抗体的Fc区域与细菌表面的蛋白质相互作用，特异性识别对应的细菌；借助便携式微流控芯片分析仪检测各样品孔中量子点的荧光信号，可以实现同时对三种革兰氏阳性食源性致病菌的高通量检测，可在1分钟内同时检测32个样品，并且所需的样品量少，每孔不超过5μL；本发明公开的这种免疫芯片检测技术已初步应用于牛奶样品的检测，为食源性致病菌的高通量、同时检测提供了新方法，具有广阔的应用前景。