本发明具体涉及一种诱导肿瘤细胞形成肿瘤干细胞的方法。其具体方法是将对数生长期的肿瘤细胞经同步化处理后以悬浮态接种于肿瘤干细胞诱导培养基中，间隔固定的时间周期性施以机械力悬浮，分散已贴壁的肿瘤细胞，继续培养即得。本发明通过同步化无血清处理、悬浮态接种、周期性悬浮分散的方法降低了细胞自身的粘附能力，使细胞直接进入悬浮态并完成干性肿瘤细胞的筛选过程，仅使用普通培养皿、移液枪、离心机等即可完成，在实现优质实验结果的同时打破了贵重耗材、高级设备、复杂技术限制，降低了实验成本、设备限制、技术门槛。