本发明公开了一种生物样品中外泌体分离试剂盒，其特征在于，包括：所述平衡缓冲液、洗涤液和洗脱液，所述平衡缓冲液中含有基础缓冲液和高价阳离子，所述高价阳离子选自Ca²⁺、Mg²⁺、Fe³⁺、Fe²⁺、Al³⁺、Mn²⁺、Cu²⁺和Zn²⁺中的任意一种或多种。本发明还公开了一种使用该生物样品中外泌体分离试剂盒进行外泌体分离的方法。本发明还公开了所述生物样品中外泌体分离试剂盒在诊断或区分前列腺疾病、前列腺癌术后评估、前列腺癌预后评估中收集外泌体的应用和制备以外泌体为功能成分的治疗药物中等的应用。本发明还公开了诊断前列腺疾病的试剂盒和前列腺疾病分型试剂盒。