本发明公开了一种用鱼鳔制备的生物角膜及其制备方法和应用，将新鲜鱼鳔除杂后进行脱脂、脱糖和冻融处理，再加入脱细胞液得到鱼鳔的脱细胞基质，将所述脱细胞基质用含有透光性调节剂的醇水混合液进行胶原纤维重建处理得到人工生物角膜。本发明中用鱼鳔作为制备生物角膜的材料，所获得的生物角膜在成分上与天然角膜非常接近，具有优异的光学特性和极佳的机械性能，通过体外培养细胞，表现优良的生物相容性，无细胞毒性，角膜细胞能够在材料表面正常粘附和生长，形成致密的细胞层，可在角膜移植、角膜板层修复中作为医用材料。本发明原料来源广泛、生产成本低，方便保存，便于使用，可满足组织工程角膜大量载体支架的需要。